Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程里逐渐扩展

从第一次注意到呼吸道自身抗基底到注意到1标准型高血压药理学病症的成效所部在学龄前末期就有很好的刻画，多个呼吸道自身抗基底乙型肝炎的学龄前之前有70%在血清变换后10天内患上高血压，而随访15年的学龄前这一%-减低到84%。相较之下，分之一药理学1标准型高血压一半以上的标准型1标准型高血压的发病必要还不能得到必要的学绝技研究。

日益多的人开始用到分期控制系统来定义1标准型高血压的成效：生殖在注意到多种呼吸道自身抗基底时踏入第1过渡期，注意到血糖反常时踏入第2过渡期，注意到病症时踏入第3过渡期。一些多发呼吸道自身抗基底乙型肝炎的生殖，在1期和2期，成效较慢，并发展为发病的1标准型高血压。我们之前刻画了一四组在首次扫描到多种呼吸道自身抗基底比对后多于10年无高血压的极慢成效者，这四组病人人数少，但特征非常指明。随后，我们发现呼吸道自身抗基底选择性CD8+T细胞氘底物在成效减慢的病人之前基本不存在，但在全面性发病和与此方面的高血压病人之前很容易扫描到。这可能表明，与成效病人相较，这些病人自身免疫底物的平衡增强。

以前学绝技研究表明，尽管平衡性T细胞氘(Treg)数量正常，但高血压病人存在一些系统缺陷，其之前包含对IL-2的底物能够减少。此外，高血压病人之前的现象CD4+T细胞氘可能对平衡更具抵抗性，发挥为现象T细胞氘的选择性减弱，自然产生的Treg和基底外产生的正向Treg，以及抗基底历程的CD4+T细胞氘之前IL-2底物减弱。本学绝技研究的目的是刻画了CD4+平衡性T细胞氘(Treg)在一小群极减慢成效者之前的特征，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX学绝技研究是一项以人群为基础的侧向学绝技研究，在21岁请注意确诊的病人亲戚之前检查1标准型高血压的危险因素。我们之前刻画了经常性减慢成效者的特征，他们保证多重呼吸道自身抗基底乙型肝炎多于10年，但不能注意到高血压的药理学病症，慢性或非同步进行性自身免疫。随后，10名继续保证无高血压并乐意提供大量基底液比对的减慢成效者纳入T和B细胞氘系统统计分析。在目前的学绝技研究之前，8名慢成效者(SP四组)，之前位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的呼吸道自身抗基底乙型肝炎。所有的组织者都处于1标准型高血压成效的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身抗基底对某些抗基底的乙型肝炎底物，然而，一名病人已经处于2期多于6年，但不能注意到药理学病症，一名病人被诊断为高血压，该实验者72岁，在采集物理比对时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析之前对该NADPH同步进行了单独统计分析。分离外周血单个氘细胞氘(PBMCs)，转用多变量流式细胞氘绝技和T细胞氘选择性检验统计分析NADPH之前Treg的振幅、表标准型和系统。用到FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和回归)同步进行无监理聚类统计分析，统计分析Treg表标准型。

结果：与健康NADPH相较，来自慢成效基底的无意识CD4+T细胞氘的监理聚类显示，触发的无意识CD4+ Treg振幅减低，与抑制作用正向的TNFR方面蛋白(GITR)表达出来减低有关。一名HbA1c增大的病人与成效减慢者和最简单的对照四组相较，Treg谱有所不同。系统于数，与健康NADPH相较，来自减慢成效基底的Treg介导的CD4+现象T细胞氘选择性明显受损。发挥为对现象CD4+T细胞氘CD25和CD134表达出来的选择性减低。

左图1 深入的表标准型统计分析显示，CD4+Treg冠状病毒在慢成效队列之前减低。由FlowSOM分解成的Treg寝室，周围在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -细胞氘上。根据标有物表达出来比对出10个元簇:无意识T细胞氘_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞氘;HLA-DR + GITR +无意识T细胞氘;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用到9个不同Treg标有分解成的10个元簇的MST。每个节点代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在节点四组周围手绘。每个节点之前的饼左图对此单个标有的表达出来层次。(b)每个元聚类的热左图，以显示整基底标有表达出来。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)分解成左图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对轻元素为每个metacluster箱两条路线左图(轻元素> 0.05%)未确定为HD和SP四组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞氘(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞氘(l)。橘色边框代表这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取记号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 用到CITRUS的预测模标准型推测，Treg振幅的减低是成效减慢的徽章。分级奈斯(a - f)和大豆统计分析(g-k)比较SP组织者和最简单的HD组织者在CD4+CD45RA−T细胞氘上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的别具特色左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来同步进行分离，模拟FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(布氏)四组以及NADPHSP 606(橘色)之前CD25+ cd127的振幅摘要左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯子集的箱两条路线左图;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇折叠由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来低压填充，箭头引人注目的簇被识别为SP和HD队列错综复杂的不同。(j)箱两条路线左图显示了在SP(布氏)和HD(灰点)四组之前，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对轻元素(%-)。(k)直方左图显示每个簇的表标准型(粉色)和Treg标有相对表达出来与历史背景表达出来(粉色);上列，寄存器Treg_3;上头偷偷地，寄存器Treg_4。历史背景与所有其他簇之前标有的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取记号秩检验

左图3 与健康献血者相较，成效减慢者无意识treg的GITR减低。每个无意识CD4+T细胞氘元簇(无意识T细胞氘_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞氘;HLA-DR + GITR +无意识T细胞氘;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个表达出来标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表达出来热左图(sp606不包含在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(粉色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR表达出来串接，显示直方左图(c)和摘要左图(d)。Wilcoxon选取记号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有NADPH包含，p< 0.05(粉色)NADPHSP 606和最简单的HD不包含在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR表达出来，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(粉色)和SP 606(橘色)串接，显示直方左图(e)和摘要左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取记号秩检验

左图4 来自减慢成效的CD4+ treg细胞氘控制现象CD4+T细胞氘的能够减少。SP四组用粉色的两条路线和边框对此，HD四组用紫色的两条路线和边框对此，橘色的两条路线/边框对此NADPHsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞氘同步进行分选。CD4+CD25−(此番者)被标有为CFSE, Treg按观察的%-硫酸铜。用抗CD3 /28微珠还原细胞氘，培育3几天后同步进行流式细胞氘绝技扫描。(a-d)与CD4+此番者相对应的treg培育(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培育。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE选择性%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性%-。用到乙型肝炎对照(触发的作出底物细胞氘含treg)推算选择性%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 现象CD4+T细胞氘对减慢成效的T细胞氘还原的选择性更敏感。SP四组用粉色的两条路线和边框对此，HD四组用紫色的两条路线和边框对此，橘色的两条路线/边框对此NADPHsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞氘同步进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标有，treg按观察的%-硫酸铜。用抗CD3 /28微珠还原细胞氘，培育3几天后同步进行流式细胞氘绝技(CD25反染)和细胞氘因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培育。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE选择性百分所部(b)。(c,d) CD25选择性百分所部(c)和CD134选择性百分所部(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育之前的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们结论的结论是，来自减慢成效子的还原无意识CD4+Treg在GITR表达出来之前得到了扩展和多样化，务实了全面性学绝技研究Treg在1标准型高血压安全性生殖之前的异质性的必要性。

文中出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28